Proyectos

Resúmenes de los proyectos de Investigación en ejecución

  • Vacunas antitumorales

    A cargo de los Dres José Mordoh y Dra. Marcela Barrio

    Ensayos clínicos y estudios preclínicos con vacunas antitumorales para melanoma cutáneo.

    1. Ensayo CASVAC-0401: estudio clínico de fase II-III de la vacuna terapéutica CSF-470 para melanoma cutáneo".

      Desde 2009 estamos llevando a cabo el estudio Clínico CASVAC0401: “ESTUDIO ABIERTO, RANDOMIZADO, COMPARATIVO ENTRE EL TRATAMIENTO CON UNA VACUNA ALOGENEICA IRRADIADA (CSF-470) COADYUVADA CON BCG Y MOLGRAMOSTIN (RHUGM-CSF), Y EL TRATAMIENTO CON INTERFERÓN-ALFA (IFN-ALFA), EN PACIENTES CON MELANOMA ESTADÍO IIB, IIC O III POST CIRUGÍA.ESTUDIO DE FASE II-III”
      En abril de 2015 hemos obtenido la aprobación de la fase II de dicho estudio por la ANMAT.
      Se elaboraron los documentos pertinentes para presentar la información conforme a lo normado a través de las disposiciones ANMAT 4622/2012 y 7075/2015 esta última para productos biológicos, y a la Circular 004 relativa al registro de Medicamentos Bajo Condiciones Especiales, a fin de solicitar el registro de la vacuna VACCIMEL/CSF-470 ante ANMAT; la solicitud fue formalmente presentada el 1 de Octubre del corriente y se encuentra en evaluación. En este año se continúa con la fase III del Estudio CASVAC0401. Ya se han reclutado 34 pacientes con melanoma, sobre 108 pacientes. Los resultados obtenidos hasta ahora indican que:

      • Tras la administración de más de 200 dosis de vacuna a pacientes con melanoma cutáneo de alto riesgo, el tratamiento con CSF-470 + BCG + rhGM-CSF resulta seguro, tiene buena tolerancia y solamente se ha reportado un evento adverso serio, sin secuelas.
      • En los pacientes tratados en este estudio con IFN alfa 2b (n=11), se han reportado eventos adversos de grado 2 y 3, que incluyen toxicidad cardíaca, leucopenia, neutropenia y toxicidad hepática que obligaron a la suspensión del mismo.
      • La Sobrevida Libre de Enfermedad a Distancia (SLED) de los pacientes vacunados con CSF-470 + BCG + rhGM-CSF resulta significativamente superior a la obtenida con tratamiento con IFN alfa 2b.
      • La vacunación con CSF-470 + BCG + rhGM-CSF está asociada con una calidad de vida significativamente superior al tratamiento con IFN alfa 2b.
      • Se ha evidenciado una respuesta inmune inducida en los pacientes vacunados de tipo celular y humoral.

      Estamos actualmente preparando el manuscrito para enviar a publicar los resultados de la Fase II del estudio CASVAC0401.

    2. Desarrollo y optimización de vacunas de células dendríticas:

      Desde hace algunos años estamos trabajando en el desarrollo y optimización de otro tipo de vacuna para melanoma cutáneo basada en el uso de células dendríticas (CD) del paciente, capaces de dirigir la respuesta inmune adaptativa por su capacidad de presentación antigénica.
      Los resultados obtenidos nos permiten concluir que el agregado de un cocktail de citoquinas (IL-1-beta, IL-6, TNF-alfa y Prostaglandina E2) durante la preparación de la vacuna CD/Apo-Nec mejora la performance de la vacuna y que la misma es combinable con el uso de los adyuvantes testeados (BCG, Imiquimod, GM-CSF). La vacuna CD/Apo-Nec + CC + Adyuvantes podría ser evaluada en el futuro en estudios clínicos con pacientes con melanoma.
      En los últimos meses nos abocamos a caracterizar in vitro la estimulación de linfocitos vírgenes (naïve) de sangre periférica con vacunas CD/Apo-Nec autólogas. Mediante estos ensayos in vitro hemos podido evaluar de manera preliminar la respuesta antitumoral generada por la vacuna CD/Apo-Nec + CC, observando un perfil Th1 que apoya el análisis clínico de esta vacuna en el futuro.

    3. Estudio de marcadores con potencial pronóstico en melanoma cutáneo (MC)

      El MC es resistente a las terapias convencionales como quimioterapia o radioterapia. Sin embargo, el estudio de la biología de este tumor ha permitido identificar la alteración de genes involucrados en la proliferación celular como BRAF. Esto condujo al diseño de terapias dirigidas con inhibidores de BRAF mutado. Existe actualmente la necesidad de mejorar el diagnóstico inicial y predecir la evolución del paciente. Para contribuir a ello, comenzamos el análisis de un grupo de pacientes con MC en diferentes estadios de la enfermedad y distinta evolución clínica.
      Además hemos caracterizado los tumores en cuanto a parámetros histopatológicos y estudiado el infiltrado inmune presente en los tejidos tumorales. Estos resultados indican que la población local de pacientes con MC tendría una mayor prevalencia del oncogén BRAF y que este parámetro tendría relación con otros parámetros clínico-patológicos comúnmente evaluados en las biopsias. Esto abre la posibilidad de estudiar el estado mutacional del oncogén BRAF como factor pronóstico, con el fin de mejorar la estadificación del MC en los pacientes.
      El estudio del contexto immune en las biopsias de MC de los pacientes intervinientes en el estudio CASVAC 0401 (n=30) se realizó mediante inmunohistoquímica y análisis histopatológico. Los resultados iniciales sugieren que el análisis del contexto inmune en MC puede contribuir a mejorar el pronóstico y predecir la respuesta a las inmunoterapias emergentes, lo cual se continuará investigando en la totalidad de los pacientes que participan de este estudio.

    4. Desarrollo de una metodología de preservación de células eucarióticas por liofilización aplicada a la vacuna antitumoral CSF470

      El objetivo específico de este proyecto es diseñar una formulación y protocolo nuevo para elaborar la vacuna de células irradiadas CSF470, reemplazando al DMSO por otros criopreservantes, manteniendo sus propiedades biológicas y posteriormente establecer un protocolo de liofilización de las mismas.
      Los resultados obtenidos hasta ahora nos permiten alcanzar la conservación de la morfología celular y parte del contenido antigénico de la vacuna liofilizada con TRE, pero con pérdida de la integridad de la membrana plasmática. Estamos trabajando actualmente en la incorporación de excipientes que permitan la estabilización de las membranas durante la deshidatación, y variando los parámetros físicos del proceso (temperatura, presión de vacío y volumen de la muestra).
      Este proyecto es llevado a cabo por la becaria de doctorado Lic. Ivana J. Tapia.

  • Estudios sobre celulas madre leucemicas en leucemia mieloide cronica (LMC)

    A cargo del Dr. Michele Bianchini

    Durante este año en el marco del proyecto continuamos con el reclutamiento de pacientes y procesamiento de las muestras. A la fecha contamos con las muestras de 26 pacientes; mediante el ensayo funcional in vitro de células iniciadoras de cultivo de largo término (LTC-IC) pudimos detectar células inmaduras en el linaje hematopoyético, bajo condiciones que reproducen algunos de los aspectos presentes en el microambiente de la médula ósea. Pudimos recuperar las colonias extraídas de la metilcelulosa, y las células procesadas para extracción de RNA mediante micrométodo. En este momento nos encontramos probando métodos alternativos de detección de colonias Ph+ y de amplificación de las colonias individuales. Dado que el proyecto aún no ha concluido, aún nos encontramos reclutando pacientes y realizando ensayos de LTC-IC. A su vez, nos encontramos intentando aumentar la sensibilidad del método para poder detectar células madre leucémicas que se encuentren en muy baja frecuencia y con baja expresión de BCR-ABL.

  • Estudios de inmunosupresión / inmunoestimulación en tumores sólidos (cáncer colorrectal / cáncer de mama y melanoma)

    A cargo de la Dra. Estrella Levy
    1. Cáncer Colorrectal

      Las células Natural Killer (NK) son parte de la respuesta inmune innata y son capaces de reconocer células blanco a través de sus receptores de superficie, desencadenando señales activadoras o inhibitorias. Con la incorporación de mayor número de pacientes, durante este año estudiamos diversas asociaciones entre la capacidad funcional y el fenotipo alterado de los pacientes con CCR. En todos los ensayos, la activación con la citoquina IL-15 fue capaz de restaurar el fenotipo y la actividad lítica de células NK, alcanzando el status de los donantes sanos.
      Nuestros resultados sugieren que las alteraciones fenotípicas de células NK de sangre periférica de pacientes con CCR presentan alteraciones fenotípicas que impactan en su capacidad lítica, necesaria para la eliminación de células tumorales, pudiendo contribuir a la progresión del cáncer. Sin embargo es posible restaurar dichas funciones con la administración de la IL-15, que podría contribuir con terapias antitumorales en CCR.

    2. Cáncer de mama: Inmunoterapia en cáncer de mama triple negativo (CMTN)

      Actualmente estamos estudiando la inducción de una respuesta de células T específica y prolongada que podría beneficiar a las pacientes, dado que el CMTN se asocia con una alta tasa de recaída. Nuestro objetivo actual es estudiar el efecto de la “opsonización” por Cetuximab de células de CMTN con la subsecuente activación de las células NK y su impacto sobre las funciones de células dendríticas (CDs). Resultados preliminares sugieren que las células NK activadas ante la presencia de Cetuximab, producen funciones inmunoregulatorias además de las citotóxicas, promoviendo la maduración de las CDs y fagocitosis de las células tumorales. Esto podría conducir a aumentar la presentación a linfocitos T CD8+, lo cual será evaluado en próximos estudios.

    3. Melanoma

      En el contexto del Ensayo Clínico (CASVAC-0401, NCT01729663), nos propusimos investigar la migración de leucocitos promovida por la vacuna y sus adyuvantes. En ensayos in vitro usando transwells, la vacuna CSF-470 indujo alta atracción de células polimorfonucleares y linfocitos en comparación al medio de cultivo.
      De estos resultados, podemos concluir que la vacuna CSF-470 recluta linfocitos de la inmunidad innata y adaptativa, que podrían favorecer el procesado y la presentación de los antígenos de la vacuna.